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胚胎的冷冻程序

冷冻卵子/精子

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胚胎的冷冻程序

来源:本站原创    更新时间:2021-05-15

冷冻原核期和卵裂期胚胎使用的方法是基千 Lassalle等描述的三步法. 用丙二醇和庶糖作为 CPAs。冷冻试剂均来自多家生产商供应的成品试剂。 基本配方如下:
 
溶液 A:磷酸缓冲盐水(PBS)+20%血清
溶液B:PBS+20%血清+l.5mol/LPROH
溶液C:PBS+20%血清+l.5mol/LPROH+O.lmol/L荒糖
胚胎冷冻
我们认为温度的控制在整个冷冻过程中是很重要的,因此我们将冷冻液加热到37't,然后将胚胎和试剂同时从孵箱中移出 ,以相同的速率降至室温。
 
冷冻时我们将预先选好的胚胎从覆盖油的培养液彶滴中移出 , 放人四孔板中装有溶液A的孔l 中 , 培养胚胎的Jill和四孔板都要清楚地标记患者的个人信息 ,整个过程都经过双人核对。如果有多名患 者的胚胎需要冷冻, 在我们会先将患者的胚胎放入相应的溶液A中,待前一位患者的胚胎均转移完毕 后再继续处理后面的患者胚胎。 接下来我们将按照患者顺序将溶液A中的胚胎放入溶液 B 中 15min,然后放入溶液 C 的孔中15min。在胚胎与冷冻液平衡的过程中, 我们会利用这段时间将MRV冷冻仪准备好并完成一些书面记录工作以及胚胎存放位究的确认。 随后 ,将胚胎装入储存容器中,例如:普通塑料麦管 、 CBS'™ 高安全性麦管或玻璃安瓬。 在Bourn Hall 诊所,我们依然习惯使用安瓬,因为它经过完全的高温灭菌,有效减少污染,而且它的容积较大,可以很好的适应温度波动.
 
用无菌微批吸管将胚胎从四孔板中移出并放入装有 0.5ml 溶液 C的安部中 , 这个安部事先标记好患者的全名、年龄 、胚胎数扭和日期。 整个过程都经双人核对。每个安颌中装1到2个胚胎 ,以便解冻时选择。解冻时尽菌只解冻移植所需数批的胚胎。安颌经加热封口后, 稳定到室温然后放入冷冻仪开始进入冷冻程序。
 
冷冻程序结束时, 将安瓶迅速从冷冻仪移入标记好的支架管中 ,不同的患者标以不同颜色,再将其移入液氮罐中相应的位置, 打印冷冻数据并存档以便将来分析。